• 仪器无忧网首页
  • 全国免费热线:400-966-1751
普通会员 一吨象

299人次浏览

价格200.00起

服务所在地区:广东省 广州市

购买服务

基本信息

  • 服务名称:
    Bio-Rad 中国 伯乐pcr仪售后维修服务电话
  • 仪器种类:
    其他
  • 服务项目:
    维修
  • 响应时间:
    24h
  • 服务酬金:
    500及以下
  • 维修经验:
    5年及以上
  • 服务商性质:
    单位
  • 服务形式:
    单位/全职
  • 服务描述:

    北京.广州.武汉.伯乐Bio-Radpcr仪售后维修热线:

    北京Bio-Rad维修中心:400-115-6785   急修用户:135-2223-3163

    广州Bio-Rad维修中心:020-8568-1121  急修用户:177-2802-3252

    武汉Bio-Rad维修中心:400-115-6785   急修用户:173-4331-3195

    Bio-RadPCR仪 - 技术原理;
    DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。   
     
    但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
     
    1)内参照法:在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高 效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
     
    2)竞争法:选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高 效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
     
    3)PCR-ELISA法:利用或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗或生物素酶标抗体-辣根酶结合物,最终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
     
    2.内标在传统定量中的作用
     
    由于传统定量方法都是终点检测,即PCR到达平台期后进行检测,而PCR经过对数期扩增到达平台期时,检测重现性极差。同一个模板在96孔PCR仪上做96次重复实验,所得结果有很大差异,因此无法直接从终点产物量推算出起始模板量。加入内标后,可部分消除终产物定量所造成的不准确性。但即使如此,传统的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。
     
    建立样品准备区
     
    这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施:⑴PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。⑶用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。⑸大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。⑺任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
     
    2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
     
    3、建立前PCR区。
     
    该去专门用于准备各种反应,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。

联系电话

  • 400-966-1751
广东省 广州市来自:仪器无忧网
图片 内容 价格 上传时间
暂无评价...