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凝胶色谱仪洗脱次序和分配系数K

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时间:2020-01-02 11:28:28

凝胶色谱仪是使用大小不同的分子在多孔固定相(凝胶)中的选择性浸透来分离的,适用于分离分子量不同的大分子物质(Mr>2000)。


一、洗脱次序:

凝胶色谱中组分与凝胶之间无作用力,仅仅根据分子量大小来分离。凝胶是有一定孔径散布范围的多孔物质,组分进入色谱柱后,向凝胶的孔中分散,保存程度取决于孔和组分分子的大小。小分子悉数渗入小孔中,在流经色谱柱时阅历的旅程zui长。大分子彻底被排挤在孔外,阅历的旅程zui短。中等大小分子渗入部分较大的孔,而被较小的孔排挤,阅历的旅程居中。故洗脱次序是组分分子大小(分子量)的函数。


二、分配系数K:

        组分进入色谱柱,从高浓度的流动相向凝胶的孔中分散,分散平衡时:

        小分子一半在孔内,一半在孔外,K = 1。

        大分子(直径大于凝胶孔径),被悉数排挤在凝胶孔隙外,K = 0。

        中等大小分子的直径介于以上两种极限之间,0<K<1。

        故在凝胶色谱中,0≤K≤1。




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