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酶标仪的两种分类及选购指南

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时间:2019-03-11 10:14:52


酶标仪的两种分类及选购指南

酶标仪的两种分类


多功能酶标仪是实验室常用的一种仪器,酶标仪的分类方式一般可以按照滤光方式的不同和功能的不同进行划分。

一、酶标仪基于滤光方式的不同可分为滤光片式的酶标仪和光栅式酶标仪。

多功能酶标仪滤光片式酶标仪采用滤光片来进行波长的选择,酶标仪内置滤光片轮,可选择试验所需的不同波长的滤光片来进行分光,光源发出的全波谱光经过滤光片后,大部分被过滤,只剩下滤光片本身允许的波长通过,这样就可就通过滤光片来获得特定的波长。滤光片轮一般包含4-6块滤光片,通过选择不同的滤光片可获得不同的波长,但是获得的波长都是固定的,受到一定的限制,不能获得任意所需的波长,而且更换滤光片价格比较昂贵。

一般波长固定的滤光片有405,450,490,630NM。光栅式酶标仪虽然才出现短短十年,但是发展非常迅猛,现在已经是主流的酶标仪。它采用光栅进行分光,光源发出的全波谱光线经过光栅后,通过光栅上面分布的一系列狭缝的分光,就可以获得任意波长的光,波长连续可调,一般递增量为1nm.光栅式酶标仪使用方便灵活,可以通过软件选择任意波长的光,而且可以进行全波长的扫描,通过全波长扫描可以获得未知样品的吸收峰,从而可以达到检测未知样品的目的,在实验室中很受欢迎,可以进行更多实验的检测。因此目前在国内的普及程度很高。

二、按照功能的划分,酶标仪可以分为光吸收酶标仪,荧光酶标仪,化学发光酶标仪和多功能的酶标仪。

光吸收酶标仪是用来进行可见光与紫外光吸光度的检测。特定波长的光通过微孔板中的样品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量与样品的浓度呈一定的比例关系,由此可以用来定性和定量的检测。光吸收的检测技术成熟,成本低,操作简单,但是动态范围窄,灵敏度比较低,特异性不强。一般可见光和紫外光分别采用钨灯及氘灯作为光源,而紫外/可见酶标仪是可以将两种光源进行切换,适应不同测量波长的需求。荧光酶标仪是用来进行荧光的检测。通过激发光栅分光后的特定波长的光照射到被荧光物质标定的样品上后,会发出波长更长的发射光,通过发射光栅后到达检测器。荧光的强度与样品的浓度呈一定的比例。荧光检测灵敏度高,可实时检测,使用方便,检测模式多样,但是容易受外界干扰,激发光与发射光容易互相影响,干扰检测。

化学发光是来自生物化学反应中的自发光,可分为辉光型和闪光型两种类型。辉光型发光持久,稳定,能持续一段时间;闪光型发光时间短,变化快,稳定性不强,需要应用自动加样器才可以进行。化学发光中发出的光子数与样品量呈一定比例关系,化学发光酶标仪灵敏度非常高,动力学范围广。 



酶标仪选购指南


作为微孔板比色计的酶标仪,其基本功能不外乎一个比色测定,所不同的是在测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度控制等方面的差异。


1.1 测定波长    

一般酶标仪的测定波长在400~750nm或800nm之间,完全可以满足ELISA的显色测定。目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶(HRP),底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD),其在过氧化氢溶液的存在下,经HRP作用,分别氧化为2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。当pH值为5.0左右时,DAB在450nm波长处有zui大吸收,当pH值降为L 0时,zui大吸收波长移至492nm,同时摩尔消光系数变大,显色加深,因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。TMB的氧化产物联苯醌在波长450nm处有zui大消光系数,如果HRP量少,H:O:和TMB过量时,则形成蓝色的阳离子根。降低pH,即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌,使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min.因此,450nm和492nm两个波长是目前ELISA测定zui常用的。各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件,可以同时安装6~8片滤光片,所配备的滤光片均应包括上述两个波长,有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm滤光片,影响不大。除了这两个基本滤光片外,考虑到双波长比色的需要,还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片,其他滤光片可根据需要选择。有时,有的实验室希望用酶标仪作微量生化测定,故酶标仪生产厂家对其生产的酶标仪扩展了紫外检测功能,此时需要一个340nm波长滤光片。此时,酶标仪的测定波长范围就成为340-750nm或800nm。


1.2 测定的吸光度范围    

通常,酶标仪的吸光度测定范围在。0-4之间即可以满足ELISA的测定要求。在0-4.0范围,线性误差不超过±2.0%,在0.3-3.0吸光度范围内,测定精密度CV小于±0.2%;3.0-4.0Abs范围内,测定精密度CV小于士0.2%。因此,对于酶标仪的吸光度范围不必去刻意追求大的吸光度范围,主要看看在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何。


1.3 光学系统    

酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道(通常为8或12通道,亦有单通道)检测,一般为硅光管或光导纤维,除测定通道外,有的酶标仪还有一个参比通道,每次测定可进行自我校准。酶标仪的光学系统功能如何,均可通过酶标仪测定的吸光度范围、线性度、精密度和准确度等体现出来。光学系统好的话,则上述指标也应较佳。测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。单通道可避免因通道不同所致的差异。


1.4 检测速度 

酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需的时间。检测速度快,有利于提高检测的精密度,即避免由于测定过程中,因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。目前市场上常见的酶标仪检测速度都非常快,通常在数秒钟内。


1.5 震板功能    

酶标仪的震板功能是指酶标仪在对ELISA板孔进行比色测定前对其进行振荡混匀,使板孔内颜色均一。目前市场上常见的酶标仪均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋转等方式及振荡幅度等任意调节。


1.6 温育功能

温育功能是指酶标仪本身能按要求自动地控制仪器内部的温度,使得ELISA测定中微孔板条的温育过程可在仪器内部完成,而无需再外配温箱。目前,只有少部分酶标仪具有此种功能,温育功能只是酶标仪的一个附加功能,是否具有并不能说明酶标仪档次的高低及仪器的优劣。作为实验室是否选择,则可根据实验室的条件及需要来决定。




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